https://mp.weixin.qq.com/s/uji2cDm47d7GUrbtwvVDpA

利用熒光素酶報告基因法研究轉(zhuǎn)錄因子USF1結(jié)合調(diào)控馬鹿MicroRNA PC-5p-4811基因啟動子機制

作 者：高仰,韓青,吳玄燁,索婧媛,金慶梅,劉學東,鄭冬*

單 位：

東北林業(yè)大學野生動物與自然保護地學院, 哈爾濱, 150040

引文信息：

高仰,韓青,吳玄燁, 等.利用熒光素酶報告基因法研究轉(zhuǎn)錄因子USF1結(jié)合調(diào)控馬鹿MicroRNA PC-5p-4811基因啟動子機制[J].野生動物學報,2025,46(1):63-71.

DOI：10.12375/ysdwxb.20250107

摘  要

為了探究轉(zhuǎn)錄因子上游刺激因子1（USF1）調(diào)控馬鹿（Cervus elaphus）microRNA PC-5p-4811（miR-4811）基因轉(zhuǎn)錄的機理，綜合運用核心啟動子和轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點生物信息學預測分析、基因克隆、點突變和雙熒光素酶報告基因法等技術研究USF1結(jié)合miR-4811啟動子分子機制和功能。

馬鹿miR-4811啟動子缺失片段重組質(zhì)粒的相對熒光素酶活性

利用Western blotting檢測馬鹿USF1基因CDS區(qū)域過表達效果

USF1調(diào)節(jié)野生型和突變型miR-4811基因啟動子效果比較分析

結(jié)果顯示：

截切突變證實馬鹿miR-4811基因的核心啟動子位于上游-3 174 ~ -2 966 bp；

轉(zhuǎn)錄因子USF1在-3 378 ~ 73 bp區(qū)域共有2個DNA結(jié)合位點（-3 046 ~ -3 031 bp、-3 045 ~ -3 018 bp），均位于miR-4811核心啟動子內(nèi)；

USF1作為激活因子可直接結(jié)合上述位點激活miR-4811核心啟動子上調(diào)雙熒光素酶報告基因轉(zhuǎn)錄表達。

研究結(jié)果揭示了USF1參與調(diào)節(jié)microRNA基因轉(zhuǎn)錄表達的機理，并為后續(xù)USF1/miR-4811調(diào)節(jié)軸參與調(diào)控鹿茸再生發(fā)育機制提供了重要基礎數(shù)據(jù)。