提取DNA，建立基因數(shù)據(jù)庫

給野生大熊貓辦“身份證”

樹上的大熊貓　記者 何海洋攝

活動中的野生大熊貓。　唐家河國家級自然保護區(qū)管理處供圖

●四川的大熊貓保護以前以種群為單位，缺少對個體的研究和判斷

●2015年開始提取DNA、建立數(shù)據(jù)庫，有望實現(xiàn)野生大熊貓的“保護到只”和“數(shù)據(jù)化保護”

●目前已累計為500余只大熊貓的基因建檔，占全省野生大熊貓總數(shù)35%以上

“小調(diào)皮還在摩天嶺嗎？”10月9日一大早，諶利民進了值班室就問。這位唐家河國家級自然保護區(qū)管理處副處長口中的“小調(diào)皮”，是一周前進入摩天嶺區(qū)域的一只雌性大熊貓。

去年，這只被提取了DNA信息的野生大熊貓有了一個新名字——“小調(diào)皮”。從那時起，它的一舉一動，就沒離開過工作人員的視野。

2015年，我省開啟野生大熊貓DNA建檔行動。該行動旨在提取野生大熊貓的DNA，然后逐個辦理“身份證”。那么，過去的4年多時間里，四川如何給大熊貓采集“身份”？有了“身份證”，又有什么用？

野生大熊貓的DNA怎么采

糞便里附著基因較多，撿大熊貓糞便成科研人員的重要工作之一，這是一個看似簡單實則不易的技術(shù)活

“如要確定大熊貓的DNA，首先要有承載基因信息的物品。”省林業(yè)和草原局相關(guān)負責(zé)人說，大熊貓行蹤和洞穴都極為隱蔽，想要“上門辦證”難度極大。因此，尋找大熊貓的毛發(fā)、排泄物、足跡等成為重中之重。其中，附著基因較多且易于野外保存和采集的糞便，是識別大熊貓個體的最重要樣本。

撿糞便，成了科研人員的重要工作之一?？墒牵瑩旒S便并不容易。“是個技術(shù)活。”成都大熊貓繁育研究基地技術(shù)員齊敦武介紹，即便是在保護區(qū)內(nèi)，大熊貓在不同地點出沒的頻率也不一樣；不同的時間段，大熊貓的現(xiàn)身可能性也不盡相同。

怎么辦？“首先要查資料，選定區(qū)域。”諶利民說，我國已經(jīng)開展過4次大熊貓調(diào)查。在這些調(diào)查過程中，業(yè)務(wù)主管部門已初步標定了各棲息地內(nèi)大熊貓出沒熱點區(qū)域。

通常情況下，主食竹分布相對富集區(qū)、溝谷、山脊是重點的調(diào)查區(qū)域。在這些地方，有箭竹林、有水源、有隱蔽場所，是大熊貓棲息范圍比較固定的區(qū)域。但僅有這些還不夠。與大熊貓打了半個多世紀交道的大熊貓科研泰斗胡錦矗表示，大熊貓出沒的熱點區(qū)域并非一成不變，“棲息地內(nèi)部的變化、食物分布的變化、地質(zhì)災(zāi)害、人類活動等都可能影響它們的活動。”

選定區(qū)域只是第一步。而如果要成功撿到糞便，則需要選準時段。

“我們一般會選擇3月到6月這個時間段。”齊敦武介紹，原因有三：首先，這段時間大熊貓的食物主要以竹莖和竹葉為主，其糞便上的腸道脫落物較多，容易提取DNA。其次，6月之前，是四川大多數(shù)大熊貓分布區(qū)的旱季，且氣溫相對適中，利于大熊貓糞便在野外的保存。第三，春季至初夏，也是大熊貓傳統(tǒng)的求偶高峰季節(jié)。求偶期間，習(xí)慣于“走婚”的大熊貓遷徙通道相對固定，有利于提高其在某些區(qū)域的遇見率。唐家河國家級自然保護區(qū)管理處工作人員馬文虎說，每年春季，基因廊道內(nèi)的糞便相對較多，也方便“守株待兔”。

大熊貓糞便里的“密碼”怎么破

樣本如果合格，能讀出大熊貓的性別、年齡以及在棲息地的生活狀況

即便掌握了門道，想要撿到大熊貓糞便，也還是不容易。“有時候，兩三天撿不到一個。”參與栗子坪自然保護區(qū)大熊貓DNA建檔的西華師范大學(xué)教授張澤鈞說，在野外撿到大熊貓的糞便，就像“過去搞堆肥的老農(nóng)一樣高興”。

張澤鈞說，找到糞便后，接下來是樣本編號、拍照以及基礎(chǔ)信息記錄工作?；A(chǔ)信息涵蓋發(fā)現(xiàn)地、周邊環(huán)境、海拔高度等。

但這些提取到的樣本卻不一定能用。即便是撿到的糞便，也不代表一定具備提取價值——大熊貓糞便上的脫落物，往往只有10天至14天的“保質(zhì)期”。一旦時間過長，便無法提取有用信息。

王朗國家級自然保護區(qū)管理局副局長趙聯(lián)軍透露，此前，王朗國家級自然保護區(qū)搜集到的89份樣品，只有57份可以直接使用。其余的樣品，則需要重新檢查。

“一般來說，我們不會輕易放棄每個樣本的檢測。反復(fù)檢測和比對，是常有的事。”10月9日，在中國大熊貓保護研究中心都江堰基地的實驗室內(nèi)，相關(guān)技術(shù)人員介紹，這里是各地樣品送檢單位之一，技術(shù)人員在這里能對大熊貓腸道脫落細胞進行分析。

“每一組DNA分子探針，便是一只大熊貓的‘遺傳身份證’。這里面能夠讀取出大熊貓的性別、年齡以及在棲息地的生活狀況等。”該技術(shù)人員指著實驗室里的電腦說，一旦數(shù)據(jù)分析、核對完成，將會輸入檔案庫，相關(guān)科研單位、管理單位可隨時查閱。

這一過程復(fù)雜又艱辛，但作為全國率先啟動野生大熊貓DNA建檔工作的省份，四川的做法，已經(jīng)得到國家相關(guān)部門的認可。2017年，摸索兩年之后，原省林業(yè)廳發(fā)布大熊貓種群遺傳檔案建立規(guī)范，分別是《野生大熊貓糞便樣品采集及DNA提取技術(shù)規(guī)程》《大熊貓種群遺傳檔案建立技術(shù)規(guī)程》。其中，遺傳檔案領(lǐng)域技術(shù)規(guī)程，直接被相關(guān)部委采納、吸收作為全國規(guī)范。

“下一步，我們會逐步擴大檢測范圍，不斷充實數(shù)據(jù)庫。”大熊貓國家公園四川省管理局相關(guān)負責(zé)人介紹，目前我省已經(jīng)在16個有大熊貓分布的保護區(qū)開展野生大熊貓DNA建檔行動，目前已累計檢測出大熊貓500余只，占全省野生大熊貓總數(shù)35%以上。

大熊貓有了“身份證”后怎么用

可避免近親繁殖、研判遺傳疾病，實現(xiàn)“從種群到個體”的保護

如此大費周章給野生大熊貓辦理“身份證”，意義何在？

“這些都是基礎(chǔ)性工作。”胡錦矗說，近年來，隨著人類攻克大熊貓圈養(yǎng)繁殖的難關(guān)，科研重點已經(jīng)轉(zhuǎn)入野生種群的保護管理與復(fù)壯階段。而在此之前，四川的大熊貓保護是以種群為單位，“缺少對個體的研究和判斷。”

而提取DNA、建立數(shù)據(jù)庫，則有利于掌握其遺傳多樣性，為防疫、疾病治療提供更多可能。換言之，實現(xiàn)野生大熊貓的“保護到只”和“數(shù)據(jù)化保護”。

省林業(yè)和草原局野保站站長楊旭煜介紹，數(shù)據(jù)庫建立后，能識別野生大熊貓個體、判別不同大熊貓之間的親緣關(guān)系、判定大熊貓的性別。在此基礎(chǔ)上，可以實現(xiàn)野生大熊貓個體身體狀況、生活狀況、遺傳疾病的分析研究，進而有針對性地實現(xiàn)“個體保護”。

在業(yè)務(wù)管理部門看來，精細化管理已經(jīng)初步實現(xiàn)。“根據(jù)數(shù)據(jù)分析和實地調(diào)查，如今唐家河的野生大熊貓活動范圍，逐漸由高海拔向低海拔擴散，我們在這一區(qū)域加派了巡護力量。”唐家河國家級自然保護區(qū)管理處處長沈興娜告訴記者。

在相關(guān)專家的眼中，其應(yīng)用的空間很大——可以根據(jù)區(qū)域種群DNA數(shù)據(jù)分析，研判野生大熊貓的遺傳多樣性。在野化放歸時，盡量避免近親繁殖；綜合分析DNA中的個體基因信息，研判個體遺傳疾病，及時采取人工干預(yù)；研判個體身體和生理狀況，及時救助救護……

自2015年以來，四川已通過前述數(shù)據(jù)庫等技術(shù)手段，有針對性地強化棲息地巡護管理和資源環(huán)境綜合執(zhí)法，年均救護病餓野生大熊貓2只至4只。

建立基因數(shù)據(jù)庫更有效保護珍稀物種

記者檢索發(fā)現(xiàn)，在珍稀野生動物保護、開發(fā)利用領(lǐng)域，建立基因數(shù)據(jù)庫往往是當(dāng)下的“起手式”。

此前，江蘇已宣布建立麋鹿基因數(shù)據(jù)庫。而安徽和河南則分別決定對揚子鱷、朱鹮進行“數(shù)據(jù)化研究”。在國外，俄羅斯、澳大利亞分別針對北極熊、袋鼠開展了類似的科研行動。

“這是規(guī)避動物生存風(fēng)險，實現(xiàn)更有效保護的一種方式。”四川大學(xué)教授冉江洪認為，保護物種基因信息就是保存物種的多樣性。因為，DNA等記錄著每一種生物最為原始的基因信息。如果能夠進一步破譯其密碼，不僅能夠應(yīng)用于該物種的保護，甚至能為人類攻克疑難雜癥等提供借鑒和思路。

“這方面研究一定要堅定地走下去。”中科院成都生物所相關(guān)負責(zé)人認為，在大熊貓領(lǐng)域取得進展后，相關(guān)做法也可推廣至川金絲猴等珍稀物種的保護。